Cwf15, un nuevo regulador del final de transcripción esencial para el mantenimiento de la estabilidad genómica

Abstract

Cwf15 (Complexed with cdc5 protein 15) es un factor de procesamiento de RNA, esencial y evolutivamente conservado de levadura a humano, que se ha demostrado que interactúa físicamente con los componentes centrales del espliceosoma del subcomplejo Nineteen (NTC); aunque actualmente se desconoce su función molecular concreta. A lo largo de este trabajo, hemos identificado una mutación condicional en este gen que conduce a un grave problema de inestabilidad del genoma. En la condición restrictiva, las células mutantes transitan normalmente por toda la interfase e inician mitosis, pero experimentan defectos drásticos en la segregación de los cromosomas en anafase. Hemos caracterizado en profundidad el fenotipo de inestabilidad genómica en este mutante mediante biología celular, microscopía, interacciones genéticas y pruebas bioquímicas de interacción física así como experimentos de RNAseq y ChIPseq para intentar dilucidar las bases moleculares de esta conexión. Curiosamente, los datos de RNA-seq muestra la presencia de RNA extremadamente largos más allá del sitio normal de terminación de la transcripción, un fenotipo conocido como readthrough . Análisis adicionales también demuestran que otros mutantes de transcripción de terminación muestran el mismo fenotipo de inestabilidad del genoma y resultan sintéticos letales con nuestro mutante. Por otro lado, el experimento de ChIPseq muestra una acumulación aberrante del complejo encargado de la cohesión cromosómica (cohesin), lo que conduce a una anafase defectuosa. Curiosamente, este también es un fenotipo común con mutantes de terminación de la transcripción que presentan readthrouh, mostrando un comportamiento similar al del mutante de cwf15. Además, este fenotipo de inestabilidad genómica se alivia, en el mutante cwf15 como en los mutantes de terminación analizados, cuando se combina con un mutante de cohesina que reduce la cohesión de las cromátidas. En conjunto, creemos que la proteína Cwf15 posee una novedosa función en la regulación del final de transcripción. Cuando esta función se hace defectiva la transcripción continúa más allá del sitio de terminación de forma generalizada. Como consecuencia, se afecta cuantitativa y cualitativamente la distribución genómica del complejo de cohesina y esto desemboca en la segregación aberrante de los cromosomas en mitosis. Teniendo en cuenta la alta conservación evolutiva de este gen, es posible que mutaciones similares puedan originar enfermedades derivadas de la inestabilidad genómica en humano tales como el cáncer.